本方案参照2015版《化妆品安全技术规范》中禁用组分检验方法2.4第二法：高效液相色谱-紫外检测器/荧光检测器法，该法适用于化妆品中雌三醇等7种组分含量的测定。

一、方法原理

样品提取后，经高效液相色谱仪分离，紫外检测器检测，以保留时间定性，峰面积定量。

二、仪器和试剂

三、实验方法

3.1 标准系列的制备

雌**标准溶液：分别称取雌酮、雌二醇、雌三醇、己烯雌酚各0.2g（精确到0.0001g），用少量甲醇溶解，转移至100mL容量瓶中，用甲醇稀释到刻度。

雄**标准溶液：分别称取睾丸酮、甲基睾丸酮各0.6g（精确到0.0001g），用少量甲醇溶解，转移至100mL容量瓶中，用甲醇稀释到刻度，配制成含睾丸酮、甲基睾丸酮为6.00mg/mL的溶液。取此溶液 10.0mL置100mL容量瓶中，用甲醇稀释到刻度。

孕**标准溶液：称取黄体酮 0.6g（精确到 0.0001g），用少量甲醇溶解，转移至100mL容量瓶中，用甲醇稀释到刻度，配制成含孕**6.00mg/mL的溶液。取此溶液 10.0mL置于100mL容量瓶中，用甲醇稀释到刻度。

混合标准储备溶液：分别取雌**标准溶液50.00mL，雄**标准溶液5.00mL和孕**标准溶液5.00mL置于100mL容量瓶中，用甲醇稀释到刻度，配制成1mL分别含4种雌**各1.00mg、2种雄**各30.0μg和1种孕**30.0μg的混合标准储备溶液。

取混合标准储备溶液0.00mL、1.00mL、2.00mL、5.00mL于10mL具塞比色管中，用甲醇稀释至10mL刻度，制得混合标准系列溶液。

3.2 样品处理

溶液状样品：称取样品 1-2g（精确到0.001g）于10mL具塞比色管中，在水浴上蒸除乙醇等挥发性有机溶剂，用甲醇稀释到10mL，作为样品待测溶液。

膏状、乳状样品：称取样品 1-2g（精确到 0.001g）于100mL锥形瓶中，加入饱和氯化钠溶液50mL，硫酸2mL，振荡溶解，转移至100mL分液漏斗中，以环己烷30mL分三次萃取，必要时离心分离。合并环己烷层并在水浴上蒸除。用甲醇溶解残留物，转移到 10mL具塞比色管中，用甲醇稀释到刻度。混匀后，经0.45μm滤膜过滤，滤液作为样品待测溶液。

3.3 色谱条件

三、实验结果

4.1 标样谱图

4.2 标准曲线

雌三醇

雌二醇

己烯雌酚

雌酮

睾丸酮